耳木分离法又称寄主分离法。从长过银耳的野生或人工栽培的段木中分离菌丝。具体操作：截取菌龄两年以内的耳木一小段，用水冲洗后再用无菌水洗2～3次，将其浸在75％的酒精内数秒钟，再用无菌水洗去酒精，放人0.1％升汞溶液中（也可采用0.5％～1％的次氯酸钠溶液浸泡2分钟，或用1％～2％的漂白粉液浸泡2～3分钟），浸泡过的小块耳木，立即放在无菌水中，冲洗2～3次后，用灭菌的解剖刀切去表层。切靠表层木质0.5厘米小块，移入试管培养基，置于恒温箱内培养4～6天，从菌丝恢复生长处挑取菌丝，移接琼脂培养基上，经培养即成一级种。
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