一、外植体的选择与消毒
选取生长健壮、无病虫害的钙果母株为接种材料。木本植物组织培养的难度较大，其外植体的选择范围较窄，主要以当年生长的半木质化新梢或新梢上的芽点为主。
取半木质化的新梢，剪掉叶片，饱和洗衣粉水刷洗，然后用自来水冲洗30min以上，在超净工作台上，将其放入广口瓶中，在超净工作台上用70%酒精浸泡30s，然后置于0.1%氯化汞溶液中消毒10min，消毒处理时需不断振荡广口瓶，之后用无菌水冲洗5次～6次后备用。
二、培养条件
1.诱导与分化培养
在超净工作台上将消毒处理之后的外植体接种在准备好的外植体诱导培养基中，培养条件控制在温度23℃±2℃，光照时间14h/d～16h/d，光照强度120μmol·m-2·s-1～200μmol·m-2·s-1，继代周期28d，外植体诱导培养基：MS+6-BA0.8mg/L+IAA1.0mg/L以上培养基蔗糖浓度为3%，琼脂浓度为0.6%，pH值6.0。
2.生根培养
当不定芽长至2cm～3cm时，将其转入生根培养基中进行生根培养，其培养条件控制在温度23℃±2℃，光照时间14h/d～16h/d，光照强度120μmol·m-2·s-1～200μmol·m-2·s-1，其生根培养基如下：1/2MS+IBA0.4mg/L+IAA0.2mg/L。以上培养基蔗糖浓度为3%，琼脂浓度为0.6%，pH值6.0。
三、试管苗移栽
当试管苗长至2.5cm～3.5cm，叶片数6片～8片，3个～4个节间时，将根系良好的试管苗打开瓶口，在温室内炼苗7d～10d，注意保湿，逐步使试管苗适应温室环境，以防萎蔫。当叶片油亮时出瓶移栽。方法是：小心洗去培养基，栽植于沙床上，相对湿度保持在75%～80%，温度控制在20℃±2℃，当叶片转绿增大，出现1片～2片新叶，并长出白色侧根时，移入营养钵或苗床，营养土为草炭∶蛭石∶珍珠岩=5∶3∶2，注意保湿，每7d喷洒500倍多菌灵溶液，每隔2周浇灌1次0.5%的硫酸亚铁溶液或叶面喷施0.2%磷酸二氢钾。
【思考题】
1.生根苗移栽成活后常用叶面肥有哪些？使用浓度是多少？
2.叶面肥喷施周期是多长？
