一、目的与要求
1.能够利用显微镜在超净工作台上剥离出微茎尖。
2.对马铃薯微茎尖培养，长成一株完整植株。
3.对脱毒马铃薯试管苗扩繁。
4.熟悉马铃薯脱毒效果的检测方法。
二、原理
一般从外地调来的种薯，第一年或第一季种植时产量很高，但如果继续用此收获的马铃薯留种，再种植时，植株生长势明显变差，产量下降，块茎变小，这就是马铃薯退化现象。
将植物顶端分生组织及其下方的1个~3个幼叶原基-茎尖取下，应用组织培养方法将培养成完整植株的技术称为茎尖培养技术。顶端分生组织内病毒含量极少或无的原因：
1.植物体内的病毒迁移速度没有分生组织内细胞分裂和生长得快。
2.病毒在活跃分裂的分生组织细胞中复制不力。
3.分生组织内具有较高活力的病毒纯化系统，可以防病毒侵染。
三、材料、仪器、试剂
材料：马铃薯试管苗、野外生长的马铃薯苗。
仪器：超净工作台、生物显微镜、酒精灯、接种工具（接种架、剪刀、镊子、解剖针）、封口膜、捆绳。
试剂：配好的MS培养基（不加任何激素）、75%酒精、0.1%的氯化汞溶液。
四、操作步骤
1.对超净工作台、生物显微镜、接种工具消毒。
2.剥离微茎尖。将消过毒的生物显微镜放在超净工作台上，取1张消过毒的滤纸放在显微镜操作台上。取1瓶试管苗，揭开封口膜，用剪刀剪取带顶芽的切段，放在滤纸上，在显微镜下一手拿细镊子按住细嫩的茎切段，一手用解剖针慢慢地剥离，直到在显微镜看到圆亮点，即为马铃薯微茎尖。
3.用解剖针连同周围1个~2个叶原基将微茎尖慢慢划下，一同接入准备好的培养基。
4.茎尖培养基选用未添加任何激素的MS培养基，用10mL试管封装，每个试管倒入2mL培养基，每个试管接微茎尖1个。
5.接好后用封口膜封口，贴上标签纸，做好记录。
6.将试管放在培养架上培养，光照强度120μmol·m-2·s-1～160μmol·m-2·s-1，光照时间16h/d。密切关注记录试管内微茎尖的生长变化。
7.筛选发育完整的植株，剪取茎切段，进行大量扩繁。培养基基选用1/2MS+IAA0.2mg/L，培养瓶选用150mL三角瓶。共繁殖3代，第三代的材料来源于哪一初代试管苗都做好标记，切勿混杂。
8.随机选取20瓶试管苗（每3瓶~4瓶来源于同一材料），用指示植物法检测马铃薯试管苗的脱毒状况。
9.对脱除某些病毒的马铃薯试管苗进行大规模扩繁。
10.本试验共6个学时，配制两类培养基，微茎尖生长培养基与脱毒苗快繁培养基。
五、注意事项
1.解剖时必须注意使茎尖暴露的时间越短越好，因为超净工作台的气流和酒精灯发出的热都会使茎尖迅速变干。
2.在解剖镜下剥取茎尖时，一手用一把细镊子将茎芽按住，另一手用解剖针将叶片和叶原基剥掉，直至露出圆亮的茎尖生长点。
3.外植体可以取室外生长的马铃薯苗，也可以取马铃薯试管苗，从这两类苗剥取茎尖。
六、结果与分析
尽管在切取茎尖时十分小心并且对它们进行了各种消除病毒的处理，但也只有部分植株是无病毒植株。因此，对于每一个茎尖或愈伤组织产生的植株，在用作无病毒原种之前，必须进行病毒检验。由于许多病毒具有一个延迟的复苏期，因此在头18个月中必须对植株进行若干次检验，才能最终确定基病毒的有无。
发现马铃薯品种经严格的脱毒培养后仍然带毒，并不是操作不严或后期感染所致，而是因为某些病毒也能侵染茎尖分生区域，如PVX和PVS；另一种情况是品种同时感染了两种病毒，这样两种情况下都不能仅仅通过茎尖培养来消除病毒。
【作业】
1.影响马铃薯茎尖成活和脱毒效果的因素有哪些？
2.认真填写本项目实训报告单。
