与其他行商不同，伍秉鉴很愿意尝试新的投资领域，他有时投资并不单单是为了获得利益，还为了得到一个好的名声和心理上的满足。19世纪初期，随着外国商人在广州口岸的日益增多，欧美基督新教的传教士也看上了中国这片土地。
1835年，第一位美国传教医生伯驾来到广州，但由于中国一向推崇儒家的思想，注重现世，不关心彼岸世界，所以基督教一直以来都受到人们的排斥。伯驾看到在中国的传教效益甚微，便转而利用医学途径作为传教的辅助手段，创办了广州眼科医局，开始了以医疗活动为手段，以传教为目的的“医学传教”历程，同时也开始了美国医学在中国的传播。伯驾只是个刚从耶鲁大学医学系毕业的博士生，要想创办一个相当规模的眼科医局并非易事，所以他找到了当时号称“世界第一富翁”的伍秉鉴。
面对伍秉鉴，伯驾把创办眼科医局，并以此作为拯救中国人民的途径向伍秉鉴讲述了一遍。伍秉鉴念他处处急中国人之急，想中国人所想，便答应捐出10万元银元建立医局。在当时，伍秉鉴的这一举动实属首例。因为伯驾来中国的目的是传教，所以为了博得中国人民的信任，他所创办的医局不收取任何医疗费用，那么伍秉鉴的这10万银元也就相当于一个没有任何收益的投资。
1835年11月4日，伯驾终于开设了“眼科医局”，但由于中国人的传统观念，对西医总持疑惧态度，因此眼科医局的开业并不是一帆风顺。开业第一天，医局门可罗雀，直到第二天才来了一位患青光眼的妇女就诊，第三天又来了六个病人。而后，医局的情形才慢慢地转好。在伯驾的治疗下，随着病人病情的好转，人们的恐惧和疑惑逐渐消失，开始认同这个西方人主持的西医医局，就医人数也逐渐多起来了。
伯驾经营广州眼科医局长达20年之久，一直到他从政，医局业务才由另一位美国传教士嘉约翰主持。在嘉约翰的主持下，医局逐渐成为初具规模的西医院，并正式命名为博济医院，此名沿用至今。虽然伍秉鉴的这次投入没有任何利润，但他因此获得了极高的声誉，使他在以后的商业活动中更加顺利，并载入了中国的史册，这也使他成了一个比较有争议的历史人物。
伍秉鉴的投资活动并不仅限于中国，更能表现其胆略和风范的是参与美国的证券和铁路建设的投资。1837年，24岁的美国商人约翰·穆瑞·福布斯回到美国。8年前他前往中国时，还是一位不名一文的学徒。在中国，福布斯以贩卖茶叶为生，并认下了一位义父——伍秉鉴。而就是因为这层关系，在他回美国时口袋里竟多出了50万墨西哥银元的资金，他在美国利用这笔钱开始了一门新生意——修铁路，而后福布斯成了横跨北美大陆最大的铁路承建商。
另外，伍秉鉴还独立购买了美国的证券，并且向美国的铁路建设进行了多次投资。在他多方面投入的同时，也为自己换来了更多的收益，使他成了一位名副其实的跨国财团首领。
另外，伍秉鉴还凭借自己雄厚的财力笼络其他行商。十三行虽然是由官方组织起来的社会团体，可是行商的内部关系错综复杂，常常因生意产生激烈的竞争，甚至相互倾轧。于是，伍秉鉴便对这些行商恩威并用，就在英商公司要求伍家独立担任羽纱销售代理人时，他则要求将利润按比例分给全体行商。
后来，老行商刘德章因得罪英商公司失去了贸易份额，伍秉鉴出面斡旋，恢复了他的份额。行商黎光远破产充军伊犁，伍家又同外商筹款捐助他在流放地的生活费。
从1811年起，伍家就利用其雄厚资金，协助英商公司向濒于破产的大多数行商进行放债，其债款数额就高达二百余万元，使大多数资金薄弱的行商都愿意听从伍家的安排。因而，怡和行也逐渐成为了一个令人敬仰和羡慕的大型跨国财团。
